2, Taq प्लेटिनम पीसीआर मिक्स
गतिविधि परिभाषा
1 इकाई (यू) Taq प्लेटिनम डीएनए पोलीमरेज़ गतिविधि एन्जाइम को मात्रा को रूप मा परिभाषित गरीएको छ एन्सिड को अम्ल-अघुलनशील पदार्थहरुमा °४ डिग्री सेल्सियस मा sal४ डिग्री सेल्सियस मा सक्रिय सामन शुक्राणु डीएनए टेम्प्लेट/प्राइमर को रूप मा प्रयोग गरी।
गुणस्तर नियन्त्रण
एसडीएस-पृष्ठ पत्ता लगाएर शुद्धता 99%भन्दा बढी छ; Exogenous nuclease को कुनै गतिविधि पत्ता लाग्यो; मानव जीनोम मा एकल प्रतिलिपि जीन प्रभावी ढंगले प्रवर्धित गर्न सकिन्छ; कुनै महत्वपूर्ण गतिविधि परिवर्तन जब एक हप्ता को लागी कोठा को तापमान मा भण्डारण।
मुख्य प्राविधिक मापदण्डहरु
यो 5′-3 ′ exonuclease गतिविधि र 3′-5 ′ exonuclease गतिविधि छ, र यसको निष्ठा Pfu पोलीमरेज को छेउमा छ। Taq प्लेटिनम पोलीमरेज को विस्तार गति Pfu पोलीमरेज भन्दा छिटो छ र प्रवर्धन दक्षता अधिक छ। पीसीआर उत्पादनहरु सीधा कुंद अन्त lAgated गर्न वा टीए भेक्टर संग क्लोन गर्न सकिन्छ। यदि क्लोनिंग दक्षता सुधार गर्न को लागी आवश्यक छ, यो पहिले शुद्ध गर्न को लागी सिफारिश गरीन्छ र टीए वेक्टर मा क्लोनिंग गर्नु अघि ३'-डीए overhangs जोड्नुहोस्।
एक ट्यूब Taq प्लेटिनम MasterMix (राष्ट्रिय उच्च प्रविधि उत्पादन प्रमाणीकरण)
Ta Taq प्लेटिनम MasterMix विशिष्टता र पीसीआर प्रतिक्रिया को संवेदनशीलता मा सुधार गरीएको छ र उच्च जीसी सामग्री, माध्यमिक संरचना र जस्तै संग जटिल टेम्पलेट्स बढाउन सक्नुहुन्छ। लक्ष्य टेम्प्लेट को रूप मा कम 2 प्रतियां प्रवर्धित गर्न सकिन्छ, अधिक सटीक प्रयोगात्मक परिणाम सुनिश्चित।
Ta अद्वितीय Taq प्लेटिनम MasterMix सूत्र सम्पूर्ण प्रतिक्रिया प्रणाली धेरै स्थिर बनाउँछ, र गतिविधि 4 repeated C मा बारम्बार फ्रीज-पिघलना वा दीर्घकालीन भण्डारण द्वारा प्रभावित हुनेछैन।
■ स्थिर र कुशल पूर्व तयार पीसीआर मिश्रित समाधान सञ्चालन छिटो र सरल बनाउन सक्छ, धेरै श्रम तीव्रता र नमूना त्रुटि कम गर्न। उच्च प्रदर्शन पीसीआर enhancer र अनुकूलक पनि मिश्रण मा शामिल छ, जो पीसीआर शर्तहरु मा आवश्यकताहरु लाई कम गर्दछ।
■ यो उत्पादन दुबै डाई युक्त र डाई मुक्त प्रणाली छ। डाई युक्त MasterMix उत्पादनहरु पीसीआर पछि सीधा electrophoresed गर्न सकिन्छ, लोड बफर जोड्ने बिना।
अनुप्रयोगहरु
यसले जीनोम जस्ता जटिल टेम्प्लेटहरु बाट उच्च निष्ठा उत्पादनहरु लाई बढाउन Pfu पोलीमरेज लाई प्रतिस्थापन गर्न सक्छ, र यो यस्तो अभिव्यक्ति जीनको क्लोनिंग, साइट विशिष्ट उत्परिवर्तन र एकल न्यूक्लियोटाइड पोलिमोर्फिज्म (SNP), आदि को विश्लेषण जस्ता अनुप्रयोगहरु को लागी उपयुक्त छ।
पीसीआर प्राइमर डिजाइन मा सावधानीहरु:
प्राइमर लम्बाइ सामान्यतया २०-२५ मेर हुन्छ। जे होस्, जब लामो टुक्रा पीसीआर प्रदर्शन, प्राइमर लम्बाई 30-35 मेर सम्म बढाउनु पर्छ।
■ त्यहाँ दुई प्राइमरहरु को बीच कुनै पूरक जोडी छैन, विशेष गरी 3 ′ अन्त मा अन्तिम 3 आधारहरु को लागी।
■ जीसी सामग्री ५०-60०%, र स्थानीय धनी जीसी वा AT बाट बच्न पर्छ। क्रम मा प्राइमर र टेम्प्लेट stably बाध्य बनाउन को लागी, 3 ′ अन्त मा धनी संरचना बाट बच्न।
Secondary माध्यमिक संरचना बनाउन प्राइमरबाट बच्नुहोस्।
T एक अर्काको नजिक टीएम तापमान संग दुई प्राइमर चयन गर्नुहोस्।
पीसीआर को लागी प्राइमर को टीएम मूल्य को गणना:
■ जब प्राइमर २० मेर भन्दा कम हुन्छ: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C)।
■ जब प्राइमर २० मेर भन्दा बढी हुन्छ: Tm = 1१.५+०.४१ G (GC%)-/००/L, जहाँ L प्राइमर को लम्बाइ हो।
((Tm-5) an C मा एनीलिंग तापमान सेट गर्नुहोस्।
पीसीआर प्राइमर इनपुट
प्राइमर को उचित अन्तिम एकाग्रता 0.1 माइक्रोन र 1.0 माइक्रोन को बीच चयन गर्न सकिन्छ। धेरै कम एक प्राइमर एकाग्रता प्रवर्धन उत्पादनहरु को कम उपज को लागी नेतृत्व गर्दछ, जबकि धेरै उच्च एक प्राइमर एकाग्रता गैर विशिष्ट प्रवर्धन को लागी अधिक प्रवण छ। सामान्यतया, जब टेम्प्लेट डीएनए को मात्रा ठूलो वा जटिल टेम्प्लेट डीएनए (जस्तै मानव जीनोम डीएनए) एक टेम्पलेट को रूप मा प्रयोग गरिन्छ, प्राइमर एकाग्रता कम हुनु पर्छ। जब टेम्प्लेट डीएनए को मात्रा सानो वा साधारण टेम्पलेट डीएनए (जस्तै, प्लाज्मिड डीएनए, आदि) एक टेम्पलेट को रूप मा प्रयोग गरीन्छ, प्राइमर एकाग्रता उच्च हुनु पर्छ।
सबै उत्पादनहरु ODM/OEM को लागी अनुकूलित गर्न सकिन्छ। विवरण को लागी,कृपया अनुकूलित सेवा (ODM/OEM) क्लिक गर्नुहोस्
  |
टेम्पलेट को रूप मा जीनोमिक डीएनए को उपयोग 1 kb टुक्रा बढाउन को लागी पीसीआर प्रतिक्रिया पछि, वैद्युतकणसंचलन पत्ता लगाउन को लागी 5 takel लिनुहोस्। |
A-1 टेम्पलेट
■ टेम्पलेट प्रोटीन अशुद्धता वा Taq अवरोधक, आदि समावेश गर्दछ DNAPnify डीएनए टेम्पलेट, प्रोटीन अशुद्धता हटाउन वा शुद्धिकरण किट संग टेम्पलेट डीएनए निकाल्नुहोस्।
Template टेम्पलेट को विकृति पूर्ण छैन rop उपयुक्त रूप बाट विकृति तापमान वृद्धि र विकृति समय लम्बाउने।
■ टेम्पलेट गिरावट the टेम्प्लेट पुन: तयार गर्नुहोस्।
A-2 प्राइमर
Pri प्राइमर को गरीब गुणस्तर eRimer- संश्लेषण प्राइमर।
■ प्राइमर गिरावट ——Aliquot संरक्षण को लागी सानो मात्रा मा उच्च एकाग्रता प्राइमर। धेरै चिसो र पग्लन वा दीर्घकालीन 4 डिग्री सेल्सियस cryopreserved बच्न।
Pri प्राइमर को अनुचित डिजाइन (जस्तै प्राइमर लम्बाई पर्याप्त छैन, प्राइमर, आदि को बीच गठन dimer) -पुन: डिजाइन प्राइमर (प्राइमर dimer र माध्यमिक संरचना को गठन बाट बच्न)
A-3 मिलीग्राम२+एकाग्रता
■ मिलीग्राम२+ एकाग्रता धेरै कम छ - राम्रो संग Mg बढाउनुहोस्२+ एकाग्रता: एमजी अनुकूलन२+ इष्टतम Mg निर्धारण गर्न 0.5 मिमी को एक अन्तराल संग 1 मिमी देखि 3 मिमी को प्रतिक्रियाहरु को एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता२+ प्रत्येक टेम्पलेट र प्राइमर को लागी एकाग्रता।
A-4 एनीलिंग तापमान
■ उच्च annealing तापमान प्राइमर र टेम्पलेट को बाध्यता लाई प्रभावित गर्दछ। Ne annealing तापमान घटाउनुहोस् र २ डिग्री सेल्सियस को एक ढाल संग हालत अनुकूलन।
A-5 विस्तार समय
■ छोटो विस्तार समय extension विस्तार समय बढाउनुहोस्।
घटना: नकारात्मक नमूनाहरु पनि लक्षित अनुक्रम ब्यान्ड देखाउँछन्।
पीसीआर को A-1 प्रदूषण
Target लक्ष्य अनुक्रम वा प्रवर्धन उत्पादनहरु को क्रस प्रदूषण fully सावधानीपूर्वक नकारात्मक नमूना मा लक्षित अनुक्रम युक्त नमूना pipet वा तिनीहरूलाई अपकेंद्रित्र ट्यूब बाहिर फैलाउन। अभिकर्मक वा उपकरण विद्यमान न्यूक्लिक एसिड लाई समाप्त गर्न को लागी आटोक्लेभ हुनु पर्छ, र प्रदूषण को अस्तित्व नकारात्मक नियन्त्रण प्रयोगहरु को माध्यम बाट निर्धारित गरिनु पर्छ।
■ अभिकर्मक प्रदूषण liAliquot अभिकर्मक र कम तापमान मा स्टोर।
A-2 प्राइमr
■ मिलीग्राम२+ एकाग्रता धेरै कम छ - राम्रो संग Mg बढाउनुहोस्२+ एकाग्रता: एमजी अनुकूलन२+ इष्टतम Mg निर्धारण गर्न 0.5 मिमी को एक अन्तराल संग 1 मिमी देखि 3 मिमी को प्रतिक्रियाहरु को एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता२+ प्रत्येक टेम्पलेट र प्राइमर को लागी एकाग्रता।
■ अनुचित प्राइमर डिजाइन, र लक्ष्य अनुक्रम गैर लक्ष्य अनुक्रम संग समरूपता छ। E पुनः डिजाइन प्राइमरहरु।
घटना: पीसीआर प्रवर्धन ब्यान्ड अपेक्षित आकार संग असंगत छन्, या त ठूलो वा सानो, वा कहिले काहिँ दुबै विशिष्ट प्रवर्धन ब्यान्ड र गैर विशिष्ट प्रवर्धन ब्यान्ड हुन्छन्।
A-1 प्राइमर
Oor गरीब प्राइमर विशिष्टता
E पुनः डिजाइन प्राइमर।
■ प्राइमर एकाग्रता धेरै उच्च छ ro राम्रोसँग विकृति तापमान बढाउनुहोस् र विकृति समय लम्बाउनुहोस्।
A-2 मिलीग्राम२+ एकाग्रता
Mg एमजी२+ एकाग्रता धेरै उच्च छ - राम्रो संग Mg2+ एकाग्रता घटाउनुहोस्: Mg लाई अनुकूलित गर्नुहोस्२+ इष्टतम Mg निर्धारण गर्न 0.5 मिमी को एक अन्तराल संग 1 मिमी देखि 3 मिमी को प्रतिक्रियाहरु को एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता२+ प्रत्येक टेम्पलेट र प्राइमर को लागी एकाग्रता।
A-3 थर्मोस्टेबल पोलीमरेज
En अत्यधिक एन्जाइम मात्रा 0.5Reduce एन्जाइम मात्रा ०.५ यू को अन्तराल मा उचित।
A-4 एनीलिंग तापमान
■ annealing तापमान धेरै कम छ rop उपयुक्त annealing तापमान वृद्धि वा दुई-चरण annealing विधि अपनाउने
A-5 पीसीआर चक्र
Many धेरै धेरै पीसीआर चक्र PC पीसीआर चक्र को संख्या घटाउनुहोस्।
A-1 प्राइमरOor गरीब विशिष्टता —— प्राइमर पुनः डिजाइन, यसको विशिष्टता बृद्धि गर्न को लागी प्राइमर को स्थिति र लम्बाई परिवर्तन गर्नुहोस्; वा नेस्टेड पीसीआर प्रदर्शन गर्नुहोस्।
A-2 टेम्प्लेट डीएनए
Template टेम्प्लेट शुद्ध छैन the टेम्पलेट शुद्ध वा शुद्धीकरण किट संग डीएनए निकाल्नुहोस्।
A-3 मिलीग्राम२+ एकाग्रता
—— एमजी२+ एकाग्रता धेरै उच्च छ - राम्रो संग Mg घटाउनुहोस्२+ एकाग्रता: एमजी अनुकूलन२+ इष्टतम Mg निर्धारण गर्न 0.5 मिमी को एक अन्तराल संग 1 मिमी देखि 3 मिमी को प्रतिक्रियाहरु को एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता२+ प्रत्येक टेम्पलेट र प्राइमर को लागी एकाग्रता।
A-4 dNTP
DDNTPs को एकाग्रता धेरै उच्च dDNTP को एकाग्रता उचित कम गर्नुहोस्
A-5 एनीलिंग तापमान
LowToo कम annealing तापमान rop उपयुक्त annealing तापमान वृद्धि
A-6 चक्र
ManyToo धेरै चक्र cycle अनुकूलन चक्र संख्या
पहिलो चरण उपयुक्त पोलिमरेज छान्नु हो। नियमित Taq पोलीमरेज़ 3'-5 'exonuclease गतिविधि को कमी को कारण प्रूफरीड गर्न सक्दैन, र बेमेल धेरै टुक्राहरु को विस्तार दक्षता कम हुनेछ। तसर्थ, नियमित Taq पोलीमरेज प्रभावी ढंगले ५ kb भन्दा ठूलो लक्ष्य टुक्रा बढाउन सक्दैन। विशेष परिमार्जन वा अन्य उच्च निष्ठा पोलीमरेज़ संग Taq पोलीमरेज विस्तार दक्षता सुधार गर्न र लामो टुक्रा प्रवर्धन को आवश्यकताहरु लाई पूरा गर्न को लागी चयन गरीनु पर्छ। यसको अतिरिक्त, लामो टुक्राहरु को प्रवर्धन पनि प्राइमर डिजाइन, विकृति समय, विस्तार समय, बफर पीएच, आदि को समान समायोजन को आवश्यकता छ। सामान्यतया, १-2-२४ बीपी संग प्राइमर राम्रो उपज को लागी नेतृत्व गर्न सक्छ। आदेश टेम्प्लेट क्षति रोक्न को लागी, 4 ४ डिग्री सेल्सियस मा विकृति समय प्रति चक्र ३० सेकेन्ड वा कम गर्न को लागी, र प्रवर्धन भन्दा पहिले 4 ४ डिग्री सेल्सियस मा तापमान वृद्धि गर्न को लागी १ मिनेट भन्दा कम हुनु पर्छ। यसबाहेक, लगभग 68 डिग्री सेल्सियस मा विस्तार तापमान सेट र १ kb/मिनेट को दर अनुसार विस्तार समय डिजाइन लामो टुक्राहरु को प्रभावी प्रवर्धन सुनिश्चित गर्न सक्नुहुन्छ।
पीसीआर प्रवर्धन को त्रुटि दर उच्च निष्ठा संग विभिन्न डीएनए पोलीमेरेस को उपयोग गरेर कम गर्न सकिन्छ। सबै टाक डीएनए पोलीमेरेस मा अब सम्म पाईएको छ, Pfu एंजाइम सबैभन्दा कम त्रुटि दर र उच्चतम निष्ठा छ (संलग्न तालिका हेर्नुहोस्)। एन्जाइम चयन को अतिरिक्त, शोधकर्ताहरु लाई पीसीआर उत्परिवर्तन दर लाई अनुकूलन बफर संरचना, थर्मोस्टेबल पोलीमरेज को एकाग्रता र पीसीआर चक्र संख्या अनुकूलन सहित प्रतिक्रिया शर्तहरु लाई अनुकूलन गरेर कम गर्न सक्छ।
उत्पादन कोटिहरु
हामीलाई किन छान्नुहोस्
यसको स्थापना पछि, हाम्रो कारखाना सिद्धान्त पालन संग पहिलो विश्वस्तरीय उत्पादनहरु को विकास गरी रहेको छ
पहिले गुणस्तरीय। हाम्रा उत्पादनहरु उद्योग मा उत्कृष्ट प्रतिष्ठा र नयाँ र पुराना ग्राहकहरु को बीच ब्यवहार बिश्वास प्राप्त गरेका छन्।
- टेलिफोन: +86 010-59822688
- बिल्डिंग ५, नं 86, शुआying्गि West वेस्ट रोड, चांगपिping जिल्ला, बेइजि।
- people@tiangen.com
