छिटो साइट निर्देशित Mutagenesis किट

लक्ष्य भेक्टर मा लक्ष्य जीन मा छिटो एकल साइट वा बहु साइट उत्परिवर्तन।

साइट निर्देशित mutagenesis इन विट्रो मा जीव विज्ञान र चिकित्सा को विभिन्न क्षेत्रहरु मा एक महत्वपूर्ण प्रयोगात्मक तरीका हो, जुन प्राय जसो संशोधित र लक्षित जीन को अनुकूलन, प्रमोटरहरु को नियामक साइटहरु को अन्वेषण, साथै प्रोटीन संरचना र प्रकार्य को बीच जटिल सम्बन्ध को अध्ययन को लागी प्रयोग गरीन्छ। किटले सीधा एकल साइट उत्परिवर्तन, बहु-साइट उत्परिवर्तन साथै लक्ष्य जीन मा सम्मिलन वा मेटाउने उत्परिवर्तन को लागी वर्तमान अग्रणी टेक्नोलोजी अपनाउँछ। एकल साइट उत्परिवर्तन को उत्परिवर्तन दर 90 ०%भन्दा बढी पुग्न सक्छ। यसबाहेक, परम्परागत उत्परिवर्तन किट को विपरीत जसलाई पीसीआर, उप क्लोनिंग र अन्य समय-उपभोग गर्ने र श्रम-उपभोग गर्ने चरणहरु को धेरै राउन्ड को आवश्यकता छ, किट को संचालन सरल छ, र केवल चार चरणहरु उत्परिवर्ती तनाव निर्माण गर्न को लागी आवश्यक छ।

बिरालो। होइन	प्याकिंग आकार
44992901	20 rxn

हामीलाई ईमेल पठाउनुहोस्

उत्पादन विवरण

अक्सर सोधिने प्रश्न

उत्पादन ट्याग

विशेषताहरु

■ सरल र छिटो: किट गैर strand प्रतिस्थापन प्लाज्मिड प्रवर्धन टेक्नोलोजी अपनाउँछ। पीसीआर र उप क्लोनिंग को धेरै राउन्ड जस्तै समय-उपभोग र श्रम-उपभोग गर्ने चरणहरु बिना, यो जंगली प्रकार तनाव बाट उत्परिवर्ती तनाव को रूपान्तरण को एहसास गर्न को लागी मात्र 4 चरणहरु को आवश्यकता छ।
■ उच्च दक्षता प्राइमर: किट आंशिक रूप मा अतिव्यापी प्राइमर डिजाइन को सिद्धान्त अपनाउँछ, ताकि अधिक उत्परिवर्ती plasmids प्रवर्धन द्वारा प्राप्त गर्न सकिन्छ।
Applicable व्यापक रूपमा लागू: किट मात्र एकल साइट उत्परिवर्तन, तर यो पनि बहु साइट उत्परिवर्तन गर्न सक्दैन। यो 5 साइटहरु सम्म परिवर्तन गर्न सक्नुहुन्छ।
Adap बलियो अनुकूलनशीलता: किट १० kb को अधिकतम आकार संग प्लाज्मिड मा साइट निर्देशित उत्परिवर्तन गर्न सक्दछ, मूलतः सबै सामान्यतया प्रयोग प्लाज्मिड कभर।
■ उच्च उत्परिवर्तन दर: किट मेथाइलेटेड प्लाज्मिड टेम्प्लेट को भिट्रो र vivo मा डबल पाचन को समारोह छ, उच्च उत्परिवर्तन दर सुनिश्चित।

साइट उत्परिवर्तन प्रतिक्रिया सेटअप र पीसीआर कार्यक्रम

Single एकल प्राइमर बहु-साइट उत्परिवर्तन को लागी, उत्परिवर्तन दर एकल साइट उत्परिवर्तन को तुलना मा कम हुनेछ किनकि उत्परिवर्तन साइटहरु को संख्या मा वृद्धि भएको छ। हाम्रो प्रयोगात्मक डाटा अनुसार, जब उत्परिवर्तन साइटहरु को संख्या ५ सम्म पुग्छ, उत्परिवर्तन सकारात्मक दर ५०%मा घटाइनेछ। तेसैले, यस मामला मा, यो प्रमाणित क्लोन को संख्या बढाउन को लागी सिफारिश गरीन्छ।
Kit किट बहु-प्राइमर बहु-साइट उत्परिवर्तन को समर्थन गर्दछ, ताकि उत्परिवर्तन प्रयोग एक साथ जीन को एक विस्तृत श्रृंखला मा गर्न सकिन्छ। उत्परिवर्तन साइटहरु को संख्या को माथिल्लो सीमा अझै ५ छ।
Suggested यो सुझाव दिईन्छ कि किट मा आपूर्ति गरीएको प्लाज्मिड र प्राइमरहरु प्रयोग गर्न को लागी नयाँ उत्परिवर्तन प्रयोगहरु को लागी प्रयोग गरीरहनु पर्छ ताकि प्रयोगात्मक समस्याहरु को विश्लेषण को सुविधा को लागी।

Fast Site-Directed Mutagenesis Kit

सबै उत्पादनहरु ODM/OEM को लागी अनुकूलित गर्न सकिन्छ। विवरण को लागी,कृपया अनुकूलित सेवा (ODM/OEM) क्लिक गर्नुहोस्

अघिल्लो: माउस ऊतक प्रत्यक्ष पीसीआर किट

अर्को: 2, Pfu पीसीआर मिक्स

Q: कुनै प्रवर्धन ब्यान्ड छैन

A-1 टेम्पलेट

■ टेम्पलेट प्रोटीन अशुद्धता वा Taq अवरोधक, आदि समावेश गर्दछ DNAPnify डीएनए टेम्पलेट, प्रोटीन अशुद्धता हटाउन वा शुद्धिकरण किट संग टेम्पलेट डीएनए निकाल्नुहोस्।

Template टेम्पलेट को विकृति पूर्ण छैन rop उपयुक्त रूप बाट विकृति तापमान वृद्धि र विकृति समय लम्बाउने।

■ टेम्पलेट गिरावट the टेम्प्लेट पुन: तयार गर्नुहोस्।

A-2 प्राइमर

Pri प्राइमर को गरीब गुणस्तर eRimer- संश्लेषण प्राइमर।

■ प्राइमर गिरावट ——Aliquot संरक्षण को लागी सानो मात्रा मा उच्च एकाग्रता प्राइमर। धेरै चिसो र पग्लन वा दीर्घकालीन 4 डिग्री सेल्सियस cryopreserved बच्न।

Pri प्राइमर को अनुचित डिजाइन (जस्तै प्राइमर लम्बाई पर्याप्त छैन, प्राइमर, आदि को बीच गठन dimer) -पुन: डिजाइन प्राइमर (प्राइमर dimer र माध्यमिक संरचना को गठन बाट बच्न)

A-3 मिलीग्राम^२+एकाग्रता

■ मिलीग्राम^२+ एकाग्रता धेरै कम छ - राम्रो संग Mg बढाउनुहोस्^२+एकाग्रता: एमजी अनुकूलन^२+ इष्टतम Mg निर्धारण गर्न 0.5 मिमी को एक अन्तराल संग 1 मिमी देखि 3 मिमी को प्रतिक्रियाहरु को एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता^२+ प्रत्येक टेम्पलेट र प्राइमर को लागी एकाग्रता।

A-4 एनीलिंग तापमान

■ उच्च annealing तापमान प्राइमर र टेम्पलेट को बाध्यता लाई प्रभावित गर्दछ। Ne annealing तापमान घटाउनुहोस् र २ डिग्री सेल्सियस को एक ढाल संग हालत अनुकूलन।

A-5 विस्तार समय

■ छोटो विस्तार समय extension विस्तार समय बढाउनुहोस्।

Q: गलत सकारात्मक

घटना: नकारात्मक नमूनाहरु पनि लक्षित अनुक्रम ब्यान्ड देखाउँछन्।

पीसीआर को A-1 प्रदूषण

Target लक्ष्य अनुक्रम वा प्रवर्धन उत्पादनहरु को क्रस प्रदूषण fully सावधानीपूर्वक नकारात्मक नमूना मा लक्षित अनुक्रम युक्त नमूना pipet वा तिनीहरूलाई अपकेंद्रित्र ट्यूब बाहिर फैलाउन। अभिकर्मक वा उपकरण विद्यमान न्यूक्लिक एसिड लाई समाप्त गर्न को लागी आटोक्लेभ हुनु पर्छ, र प्रदूषण को अस्तित्व नकारात्मक नियन्त्रण प्रयोगहरु को माध्यम बाट निर्धारित गरिनु पर्छ।

■ अभिकर्मक प्रदूषण liAliquot अभिकर्मक र कम तापमान मा स्टोर।

A-2 प्राइमr

■ मिलीग्राम^२+ एकाग्रता धेरै कम छ - राम्रो संग Mg बढाउनुहोस्^२+ एकाग्रता: एमजी अनुकूलन^२+ इष्टतम Mg निर्धारण गर्न 0.5 मिमी को एक अन्तराल संग 1 मिमी देखि 3 मिमी को प्रतिक्रियाहरु को एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता^२+ प्रत्येक टेम्पलेट र प्राइमर को लागी एकाग्रता।

■ अनुचित प्राइमर डिजाइन, र लक्ष्य अनुक्रम गैर लक्ष्य अनुक्रम संग समरूपता छ। E पुनः डिजाइन प्राइमरहरु।

Q: गैर विशिष्ट प्रवर्धन

घटना: पीसीआर प्रवर्धन ब्यान्ड अपेक्षित आकार संग असंगत छन्, या त ठूलो वा सानो, वा कहिले काहिँ दुबै विशिष्ट प्रवर्धन ब्यान्ड र गैर विशिष्ट प्रवर्धन ब्यान्ड हुन्छन्।

A-1 प्राइमर

Oor गरीब प्राइमर विशिष्टता

E पुनः डिजाइन प्राइमर।

■ प्राइमर एकाग्रता धेरै उच्च छ ro राम्रोसँग विकृति तापमान बढाउनुहोस् र विकृति समय लम्बाउनुहोस्।

A-2 मिलीग्राम^२+ एकाग्रता

Mg एमजी^२+ एकाग्रता धेरै उच्च छ - राम्रो संग Mg2+ एकाग्रता घटाउनुहोस्: Mg लाई अनुकूलित गर्नुहोस्^२+ इष्टतम Mg निर्धारण गर्न 0.5 मिमी को एक अन्तराल संग 1 मिमी देखि 3 मिमी को प्रतिक्रियाहरु को एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता^२+ प्रत्येक टेम्पलेट र प्राइमर को लागी एकाग्रता।

A-3 थर्मोस्टेबल पोलीमरेज

En अत्यधिक एन्जाइम मात्रा 0.5Reduce एन्जाइम मात्रा ०.५ यू को अन्तराल मा उचित।

A-4 एनीलिंग तापमान

■ annealing तापमान धेरै कम छ rop उपयुक्त annealing तापमान वृद्धि वा दुई-चरण annealing विधि अपनाउने

A-5 पीसीआर चक्र

Many धेरै धेरै पीसीआर चक्र PC पीसीआर चक्र को संख्या घटाउनुहोस्।

Q: Patchy वा धब्बा ब्यान्ड

A-1 प्राइमरOor गरीब विशिष्टता —— प्राइमर पुनः डिजाइन, यसको विशिष्टता बृद्धि गर्न को लागी प्राइमर को स्थिति र लम्बाई परिवर्तन गर्नुहोस्; वा नेस्टेड पीसीआर प्रदर्शन गर्नुहोस्।

A-2 टेम्प्लेट डीएनए

Template टेम्प्लेट शुद्ध छैन the टेम्पलेट शुद्ध वा शुद्धीकरण किट संग डीएनए निकाल्नुहोस्।

A-3 मिलीग्राम^२+ एकाग्रता

—— एमजी^२+ एकाग्रता धेरै उच्च छ - राम्रो संग Mg घटाउनुहोस्^२+ एकाग्रता: एमजी अनुकूलन^२+ इष्टतम Mg निर्धारण गर्न 0.5 मिमी को एक अन्तराल संग 1 मिमी देखि 3 मिमी को प्रतिक्रियाहरु को एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता^२+ प्रत्येक टेम्पलेट र प्राइमर को लागी एकाग्रता।

A-4 dNTP

DDNTPs को एकाग्रता धेरै उच्च dDNTP को एकाग्रता उचित कम गर्नुहोस्

A-5 एनीलिंग तापमान

LowToo कम annealing तापमान rop उपयुक्त annealing तापमान वृद्धि

A-6 चक्र

ManyToo धेरै चक्र cycle अनुकूलन चक्र संख्या

प्रश्न: कती टेम्प्लेट डीएनए एक 50 μl पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली मा जोड्नु पर्छ?

प्रश्न: लामो टुक्रा कसरी बढाउने?

पहिलो चरण उपयुक्त पोलिमरेज छान्नु हो। नियमित Taq पोलीमरेज़ 3'-5 'exonuclease गतिविधि को कमी को कारण प्रूफरीड गर्न सक्दैन, र बेमेल धेरै टुक्राहरु को विस्तार दक्षता कम हुनेछ। तसर्थ, नियमित Taq पोलीमरेज प्रभावी ढंगले ५ kb भन्दा ठूलो लक्ष्य टुक्रा बढाउन सक्दैन। विशेष परिमार्जन वा अन्य उच्च निष्ठा पोलीमरेज़ संग Taq पोलीमरेज विस्तार दक्षता सुधार गर्न र लामो टुक्रा प्रवर्धन को आवश्यकताहरु लाई पूरा गर्न को लागी चयन गरीनु पर्छ। यसको अतिरिक्त, लामो टुक्राहरु को प्रवर्धन पनि प्राइमर डिजाइन, विकृति समय, विस्तार समय, बफर पीएच, आदि को समान समायोजन को आवश्यकता छ। सामान्यतया, १-2-२४ बीपी संग प्राइमर राम्रो उपज को लागी नेतृत्व गर्न सक्छ। आदेश टेम्प्लेट क्षति रोक्न को लागी, 4 ४ डिग्री सेल्सियस मा विकृति समय प्रति चक्र ३० सेकेन्ड वा कम गर्न को लागी, र प्रवर्धन भन्दा पहिले 4 ४ डिग्री सेल्सियस मा तापमान वृद्धि गर्न को लागी १ मिनेट भन्दा कम हुनु पर्छ। यसबाहेक, लगभग 68 डिग्री सेल्सियस मा विस्तार तापमान सेट र १ kb/मिनेट को दर अनुसार विस्तार समय डिजाइन लामो टुक्राहरु को प्रभावी प्रवर्धन सुनिश्चित गर्न सक्नुहुन्छ।

प्रश्न: पीसीआर को प्रवर्धन निष्ठा कसरी सुधार गर्ने?

पीसीआर प्रवर्धन को त्रुटि दर उच्च निष्ठा संग विभिन्न डीएनए पोलीमेरेस को उपयोग गरेर कम गर्न सकिन्छ। सबै टाक डीएनए पोलीमेरेस मा अब सम्म पाईएको छ, Pfu एंजाइम सबैभन्दा कम त्रुटि दर र उच्चतम निष्ठा छ (संलग्न तालिका हेर्नुहोस्)। एन्जाइम चयन को अतिरिक्त, शोधकर्ताहरु लाई पीसीआर उत्परिवर्तन दर लाई अनुकूलन बफर संरचना, थर्मोस्टेबल पोलीमरेज को एकाग्रता र पीसीआर चक्र संख्या अनुकूलन सहित प्रतिक्रिया शर्तहरु लाई अनुकूलन गरेर कम गर्न सक्छ।

यहाँ तपाइँको सन्देश लेख्नुहोस् र हामीलाई पठाउनुहोस्

उत्पादन कोटिहरु

हामीलाई किन छान्नुहोस्

यसको स्थापना पछि, हाम्रो कारखाना सिद्धान्त पालन संग पहिलो विश्वस्तरीय उत्पादनहरु को विकास गरी रहेको छ
पहिले गुणस्तरीय। हाम्रा उत्पादनहरु उद्योग मा उत्कृष्ट प्रतिष्ठा र नयाँ र पुराना ग्राहकहरु को बीच ब्यवहार बिश्वास प्राप्त गरेका छन्।

जांच