2, Pfu पीसीआर मिक्स

अल्ट्रा शुद्ध उच्च निष्ठा Taq डीएनए पोलीमरेज़।

Pfu डीएनए पोलीमरेज क्लोन Pyrococus Furiosis डीएनए पोलीमरेज़ जीन संग E.coli बाट व्यक्त गरीन्छ र शुद्ध र धेरै स्तम्भ शुद्धीकरण द्वारा अलग। Pfu 3′-5 ′ exonuclease गतिविधि छ किनभने, यो डीएनए प्रवर्धन प्रक्रिया मा प्रूफरीड गर्न सक्नुहुन्छ, जबकि परम्परागत Taq डीएनए पोलीमरेज़ गर्न सक्दैन। यद्यपि अन्य Taq डीएनए पोलीमेरेसहरु जस्तै Vent, Deep Vent, Tli, UITma, आदि को प्रूफरीडिंग प्रकार्यहरु छन्, Pfu सबै Taq DNA पोलीमेरेस को बीचमा सबैभन्दा कम बेमेल दर छ। Pfu डीएनए पोलीमरेज सामान्य Taq डीएनए पोलीमरेज भन्दा राम्रो थर्मल स्थिरता छ, र यो 1 घण्टा को लागी 95 डिग्री सेल्सियस मा 90% भन्दा बढी गतिविधि बनाए राख्न सक्छ।

एक ट्यूब Pfu पीसीआर मिक्स (राष्ट्रिय उच्च प्रविधि उत्पादन प्रमाणीकरण)

P Pfu पीसीआर मिक्स पीसीआर प्रतिक्रिया को विशिष्टता र संवेदनशीलता मा सुधार गरीएको छ र उच्च जीसी सामग्री, माध्यमिक संरचना र जस्तै संग जटिल टेम्पलेट्स बढाउन सक्नुहुन्छ। लक्ष्य टेम्प्लेट को रूप मा कम 2 प्रतियां प्रवर्धित गर्न सकिन्छ, अधिक सटीक प्रयोगात्मक परिणाम सुनिश्चित।

P अद्वितीय Pfu MasterMix सूत्र सम्पूर्ण प्रतिक्रिया प्रणाली धेरै स्थिर बनाउँछ, र गतिविधि 4 डिग्री सेल्सियस मा बारम्बार फ्रीज-पिघलना वा दीर्घकालीन भण्डारण द्वारा प्रभावित हुनेछैन।

■ स्थिर र कुशल पूर्व-तैयार पीसीआर मिक्स समाधान अपरेशन छिटो र सरल बनाउन सक्छ, धेरै श्रम तीव्रता र नमूना त्रुटि कम गर्न। उच्च प्रदर्शन पीसीआर enhancer र अनुकूलक पनि मिश्रण मा शामिल छ, जो पीसीआर शर्तहरु मा आवश्यकताहरु लाई कम गर्दछ।

■ यो उत्पादन दुबै डाई युक्त र डाई मुक्त प्रणाली छ। डाई युक्त पीसीआर मिक्स उत्पादनहरु पीसीआर पछि सीधा electrophoresed गर्न सकिन्छ, नमूना बफर जोड्ने बिना।

बिरालो। होइन	प्याकिंग आकार
4992780	१ मिलि
4992781	5*1 मिलीलीटर
4992782	१ मिलि
4992906	5*1 मिलीलीटर

हामीलाई ईमेल पठाउनुहोस्

उत्पादन विवरण

कार्यप्रवाह

अक्सर सोधिने प्रश्न

उत्पादन ट्याग

गतिविधि परिभाषा

१ युनिट (यू) Pfu डीएनए पोलीमरेज को गतिविधि एन्जाइम को मात्रा को रूप मा परिभाषित गरीएको छ १० nmol deoxynucleotides लाई एसिड-अघुलनशील पदार्थहरुमा °४ डिग्री सेल्सियस मा ३० मिनेट भित्र सक्रिय साल्मन शुक्राणु डीएनए को प्रयोग गरी टेम्प्लेट/प्राइमर को रुपमा प्रयोग गरीन्छ।

गुणस्तर नियन्त्रण

एसडीएस-पृष्ठ पत्ता लगाएर शुद्धता 99%भन्दा बढी छ; Exogenous nuclease को कुनै गतिविधि पत्ता लाग्यो; मानव जीनोम मा एकल प्रतिलिपि जीन प्रभावी ढंगले प्रवर्धित गर्न सकिन्छ; कुनै महत्वपूर्ण गतिविधि परिवर्तन जब एक हप्ता को लागी कोठा को तापमान मा भण्डारण।

मुख्य प्राविधिक मापदण्डहरु

यो 3′-5 ′ exonuclease गतिविधि र कुनै 5′-3 ′ exonuclease गतिविधि छ। डीएनए प्रवर्धन को विस्तार गति Taq पोलिमरेज को तुलना मा कम छ, र सामान्यतया Pfu एंजाइम को विस्तार गति प्रति मिनेट 0.5-1 kb हो। Pfu को थर्मल स्थिरता Taq भन्दा राम्रो छ। उच्च जीसी सामग्री संग टेम्पलेट्स को लागी, विकृति तापमान 98 डिग्री सेल्सियस, जो Pfu पोलीमरेज को गतिविधि मा कुनै असर पर्दैन को लागी बढाउन सकिन्छ। पीसीआर उत्पादन ब्लन्ट-एन्डेड छ, जो टीए वेक्टर संग ligated वा ब्लन्ट-एन्ड वेक्टर संग क्लोन गर्नु अघि 3'-डीए overhangs संग थप्न सकिन्छ।

अनुप्रयोगहरु

यो डीएनए को उच्च निष्ठा प्रवर्धन को लागी प्रयोग गर्न सकिन्छ, जस्तै जीन अभिव्यक्ति क्लोनिंग, साइट निर्देशित उत्परिवर्तन, एकल न्यूक्लियोटाइड बहुरूपता (SNP) विश्लेषण र अन्त्य मर्मत।

सबै उत्पादनहरु ODM/OEM को लागी अनुकूलित गर्न सकिन्छ। विवरण को लागी,कृपया अनुकूलित सेवा (ODM/OEM) क्लिक गर्नुहोस्

अघिल्लो: छिटो साइट निर्देशित Mutagenesis किट

अर्को: अल्ट्रा HiFidelity पीसीआर किट

1kb टुक्रा बढाउन टेम्पलेट को रूप मा जीनोमिक डीएनए को उपयोग गर्नुहोस्।
पीसीआर प्रतिक्रिया पछि, वैद्युतकणसंचलन पत्ता लगाउन को लागी 5 μl लिनुहोस्।

Q: कुनै प्रवर्धन ब्यान्ड छैन

A-1 टेम्पलेट

■ टेम्पलेट प्रोटीन अशुद्धता वा Taq अवरोधक, आदि समावेश गर्दछ DNAPnify डीएनए टेम्पलेट, प्रोटीन अशुद्धता हटाउन वा शुद्धिकरण किट संग टेम्पलेट डीएनए निकाल्नुहोस्।

Template टेम्पलेट को विकृति पूर्ण छैन rop उपयुक्त रूप बाट विकृति तापमान वृद्धि र विकृति समय लम्बाउने।

■ टेम्पलेट गिरावट the टेम्प्लेट पुन: तयार गर्नुहोस्।

A-2 प्राइमर

Pri प्राइमर को गरीब गुणस्तर eRimer- संश्लेषण प्राइमर।

■ प्राइमर गिरावट ——Aliquot संरक्षण को लागी सानो मात्रा मा उच्च एकाग्रता प्राइमर। धेरै चिसो र पग्लन वा दीर्घकालीन 4 डिग्री सेल्सियस cryopreserved बच्न।

Pri प्राइमर को अनुचित डिजाइन (जस्तै प्राइमर लम्बाई पर्याप्त छैन, प्राइमर, आदि को बीच गठन dimer) -पुन: डिजाइन प्राइमर (प्राइमर dimer र माध्यमिक संरचना को गठन बाट बच्न)

A-3 मिलीग्राम^२+एकाग्रता

■ मिलीग्राम^२+ एकाग्रता धेरै कम छ - राम्रो संग Mg बढाउनुहोस्^२+एकाग्रता: एमजी अनुकूलन^२+ इष्टतम Mg निर्धारण गर्न 0.5 मिमी को एक अन्तराल संग 1 मिमी देखि 3 मिमी को प्रतिक्रियाहरु को एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता^२+ प्रत्येक टेम्पलेट र प्राइमर को लागी एकाग्रता।

A-4 एनीलिंग तापमान

■ उच्च annealing तापमान प्राइमर र टेम्पलेट को बाध्यता लाई प्रभावित गर्दछ। Ne annealing तापमान घटाउनुहोस् र २ डिग्री सेल्सियस को एक ढाल संग हालत अनुकूलन।

A-5 विस्तार समय

■ छोटो विस्तार समय extension विस्तार समय बढाउनुहोस्।

Q: गलत सकारात्मक

घटना: नकारात्मक नमूनाहरु पनि लक्षित अनुक्रम ब्यान्ड देखाउँछन्।

पीसीआर को A-1 प्रदूषण

Target लक्ष्य अनुक्रम वा प्रवर्धन उत्पादनहरु को क्रस प्रदूषण fully सावधानीपूर्वक नकारात्मक नमूना मा लक्षित अनुक्रम युक्त नमूना pipet वा तिनीहरूलाई अपकेंद्रित्र ट्यूब बाहिर फैलाउन। अभिकर्मक वा उपकरण विद्यमान न्यूक्लिक एसिड लाई समाप्त गर्न को लागी आटोक्लेभ हुनु पर्छ, र प्रदूषण को अस्तित्व नकारात्मक नियन्त्रण प्रयोगहरु को माध्यम बाट निर्धारित गरिनु पर्छ।

■ अभिकर्मक प्रदूषण liAliquot अभिकर्मक र कम तापमान मा स्टोर।

A-2 प्राइमr

■ मिलीग्राम^२+ एकाग्रता धेरै कम छ - राम्रो संग Mg बढाउनुहोस्^२+ एकाग्रता: एमजी अनुकूलन^२+ इष्टतम Mg निर्धारण गर्न 0.5 मिमी को एक अन्तराल संग 1 मिमी देखि 3 मिमी को प्रतिक्रियाहरु को एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता^२+ प्रत्येक टेम्पलेट र प्राइमर को लागी एकाग्रता।

■ अनुचित प्राइमर डिजाइन, र लक्ष्य अनुक्रम गैर लक्ष्य अनुक्रम संग समरूपता छ। E पुनः डिजाइन प्राइमरहरु।

Q: गैर विशिष्ट प्रवर्धन

घटना: पीसीआर प्रवर्धन ब्यान्ड अपेक्षित आकार संग असंगत छन्, या त ठूलो वा सानो, वा कहिले काहिँ दुबै विशिष्ट प्रवर्धन ब्यान्ड र गैर विशिष्ट प्रवर्धन ब्यान्ड हुन्छन्।

A-1 प्राइमर

Oor गरीब प्राइमर विशिष्टता

E पुनः डिजाइन प्राइमर।

■ प्राइमर एकाग्रता धेरै उच्च छ ro राम्रोसँग विकृति तापमान बढाउनुहोस् र विकृति समय लम्बाउनुहोस्।

A-2 मिलीग्राम^२+ एकाग्रता

Mg एमजी^२+ एकाग्रता धेरै उच्च छ - राम्रो संग Mg2+ एकाग्रता घटाउनुहोस्: Mg लाई अनुकूलित गर्नुहोस्^२+ इष्टतम Mg निर्धारण गर्न 0.5 मिमी को एक अन्तराल संग 1 मिमी देखि 3 मिमी को प्रतिक्रियाहरु को एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता^२+ प्रत्येक टेम्पलेट र प्राइमर को लागी एकाग्रता।

A-3 थर्मोस्टेबल पोलीमरेज

En अत्यधिक एन्जाइम मात्रा 0.5Reduce एन्जाइम मात्रा ०.५ यू को अन्तराल मा उचित।

A-4 एनीलिंग तापमान

■ annealing तापमान धेरै कम छ rop उपयुक्त annealing तापमान वृद्धि वा दुई-चरण annealing विधि अपनाउने

A-5 पीसीआर चक्र

Many धेरै धेरै पीसीआर चक्र PC पीसीआर चक्र को संख्या घटाउनुहोस्।

Q: Patchy वा धब्बा ब्यान्ड

A-1 प्राइमरOor गरीब विशिष्टता —— प्राइमर पुनः डिजाइन, यसको विशिष्टता बृद्धि गर्न को लागी प्राइमर को स्थिति र लम्बाई परिवर्तन गर्नुहोस्; वा नेस्टेड पीसीआर प्रदर्शन गर्नुहोस्।

A-2 टेम्प्लेट डीएनए

Template टेम्प्लेट शुद्ध छैन the टेम्पलेट शुद्ध वा शुद्धीकरण किट संग डीएनए निकाल्नुहोस्।

A-3 मिलीग्राम^२+ एकाग्रता

—— एमजी^२+ एकाग्रता धेरै उच्च छ - राम्रो संग Mg घटाउनुहोस्^२+ एकाग्रता: एमजी अनुकूलन^२+ इष्टतम Mg निर्धारण गर्न 0.5 मिमी को एक अन्तराल संग 1 मिमी देखि 3 मिमी को प्रतिक्रियाहरु को एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता^२+ प्रत्येक टेम्पलेट र प्राइमर को लागी एकाग्रता।

A-4 dNTP

DDNTPs को एकाग्रता धेरै उच्च dDNTP को एकाग्रता उचित कम गर्नुहोस्

A-5 एनीलिंग तापमान

LowToo कम annealing तापमान rop उपयुक्त annealing तापमान वृद्धि

A-6 चक्र

ManyToo धेरै चक्र cycle अनुकूलन चक्र संख्या

प्रश्न: कती टेम्प्लेट डीएनए एक 50 μl पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली मा जोड्नु पर्छ?

प्रश्न: लामो टुक्रा कसरी बढाउने?

पहिलो चरण उपयुक्त पोलिमरेज छान्नु हो। नियमित Taq पोलीमरेज़ 3'-5 'exonuclease गतिविधि को कमी को कारण प्रूफरीड गर्न सक्दैन, र बेमेल धेरै टुक्राहरु को विस्तार दक्षता कम हुनेछ। तसर्थ, नियमित Taq पोलीमरेज प्रभावी ढंगले ५ kb भन्दा ठूलो लक्ष्य टुक्रा बढाउन सक्दैन। विशेष परिमार्जन वा अन्य उच्च निष्ठा पोलीमरेज़ संग Taq पोलीमरेज विस्तार दक्षता सुधार गर्न र लामो टुक्रा प्रवर्धन को आवश्यकताहरु लाई पूरा गर्न को लागी चयन गरीनु पर्छ। यसको अतिरिक्त, लामो टुक्राहरु को प्रवर्धन पनि प्राइमर डिजाइन, विकृति समय, विस्तार समय, बफर पीएच, आदि को समान समायोजन को आवश्यकता छ। सामान्यतया, १-2-२४ बीपी संग प्राइमर राम्रो उपज को लागी नेतृत्व गर्न सक्छ। आदेश टेम्प्लेट क्षति रोक्न को लागी, 4 ४ डिग्री सेल्सियस मा विकृति समय प्रति चक्र ३० सेकेन्ड वा कम गर्न को लागी, र प्रवर्धन भन्दा पहिले 4 ४ डिग्री सेल्सियस मा तापमान वृद्धि गर्न को लागी १ मिनेट भन्दा कम हुनु पर्छ। यसबाहेक, लगभग 68 डिग्री सेल्सियस मा विस्तार तापमान सेट र १ kb/मिनेट को दर अनुसार विस्तार समय डिजाइन लामो टुक्राहरु को प्रभावी प्रवर्धन सुनिश्चित गर्न सक्नुहुन्छ।

प्रश्न: पीसीआर को प्रवर्धन निष्ठा कसरी सुधार गर्ने?

पीसीआर प्रवर्धन को त्रुटि दर उच्च निष्ठा संग विभिन्न डीएनए पोलीमेरेस को उपयोग गरेर कम गर्न सकिन्छ। सबै टाक डीएनए पोलीमेरेस मा अब सम्म पाईएको छ, Pfu एंजाइम सबैभन्दा कम त्रुटि दर र उच्चतम निष्ठा छ (संलग्न तालिका हेर्नुहोस्)। एन्जाइम चयन को अतिरिक्त, शोधकर्ताहरु लाई पीसीआर उत्परिवर्तन दर लाई अनुकूलन बफर संरचना, थर्मोस्टेबल पोलीमरेज को एकाग्रता र पीसीआर चक्र संख्या अनुकूलन सहित प्रतिक्रिया शर्तहरु लाई अनुकूलन गरेर कम गर्न सक्छ।

यहाँ तपाइँको सन्देश लेख्नुहोस् र हामीलाई पठाउनुहोस्

उत्पादन कोटिहरु

हामीलाई किन छान्नुहोस्

यसको स्थापना पछि, हाम्रो कारखाना सिद्धान्त पालन संग पहिलो विश्वस्तरीय उत्पादनहरु को विकास गरी रहेको छ
पहिले गुणस्तरीय। हाम्रा उत्पादनहरु उद्योग मा उत्कृष्ट प्रतिष्ठा र नयाँ र पुराना ग्राहकहरु को बीच ब्यवहार बिश्वास प्राप्त गरेका छन्।

जांच